(1)适当的厚度。这种厚度可以在更好的光学系统中实现高的分辨率，并且与系统的景深兼容。

 

(2)足够透明。

 

(3)能够在吸收差异的基础上形成足够的对比度。

 

几乎所有的生物材料都可以通过石蜡包埋、切片(或涂抹)、粘贴、石蜡溶解、透明等工艺获得，以满足标本厚度和透明度的要求，然后通过染色程序获得一定程度的对比度。

 

奥林巴斯透射光学显微镜常用的生物和医学组织切片，通常厚3-7微米。在该厚度范围内，当用低功率物镜(例如，10x)观察时，景深完全足以观察整个切片厚度；当用高倍率物镜(例如100倍)观察时，景深仅为切片厚度的一小部分。从上到下不断的微调可以给人一个切片的整体印象。因此，具有5^-7um厚度的常规截面可以被认为是低放大率和高放大率理想之间的折衷，这两者都允许更好的景深和分辨率。同时，由于各种原因，这种谐波厚度在实际工作中也符合很多要求。，物体的精细结构并不总是**的；其次，在非常薄(1-V25m)的切片中，生物标本的三维关系不可见。相反，当使用8至10um或更大厚度的切片时，除了分辨率的可辨别损失之外，在生物样品的不同水平上存在互惠互利。

 

在固定、包埋、切片、石蜡溶解和透明后，动物和植物材料的标本足够薄和透明

 

但是对比度很小，对比度主要是因为折射和衍射。很明显，相比之下，这个标本远非理想。但这通过减少折射效应用“吸收剂”覆盖了它，并通过吸收的差异增加了对比度。通过将标本包裹在加拿大树胶或其他合成包裹介质中，可以减少标本和周围区域之间的折射。当所有这些封装的介质通过蒸发或聚合而硬化时，它们的折射率接近于固定的或脱水的植物和动物组织的主要成分的折射率。在大多数动物和植物组织中，该值介于1.51和1.54之间。这种方法也可以消除盖玻片下反射造成的闪光。

 

一个多世纪以来，有效的方法是染色，这种方法与奥林巴斯显微镜标本形成了很好的对比。一般来说，未染色的生物样本，尤其是当放置在折射率与生物样本相似的介质中时，图像中的对比度很小。在染色样品中，对比度的增加是基于染料的选择性分布。染色标本和未染色标本的对比有很大差异。

 

生物切片通常粘贴在标准尺寸为26×76毫米、厚度为1.1^-1.3mm.的载玻片上。载玻片的两侧应该是平行的平面。对玻璃载体厚度的要求不是很严格，但是当厚度超过一些高度校正的聚光器的自由工作距离时，载玻片厚度对于聚焦光源和在物平面中形成视场孔径变得很重要。在这种情况下，厚度为0.9^-1.0mm的载玻片是合适的。